Tynnsjiktskromatografi er en kjemisk analysemetode basert på bruken av et absorberende lag med en tykkelse på 0,1-0,5 mm som en stasjonær fase. TLC-metoden kan brukes på forskjellige felt og tillater bestemmelse av et bredt utvalg av kjemiske forbindelser.
Metodeprinsipp
Metoden for tynnlagskromatografi ble født fra papirkromatografi, og de første eksperimentene ble utført på 80-tallet av 1800-tallet. Den aktive bruken av denne analysen begynte først etter 1938.
TLC-teknikken inkluderer en mobil fase (elueringsmiddel), en stasjonær fase (sorbent) og en analyt. Den stasjonære fasen påføres og festes på en spesiell plate. Platen kan være laget av glass, aluminium eller plast - dette er gjenbrukbare underlag som må vaskes grundig, tørkes og klargjøres for påføring av sorbenten etter hver bruk. Det er også mulig å bruke papirplater som kastes etter bruk.
Silikagel brukes oftest som den stasjonære fasen, men det er mulig å bruke andre sorbenter, for eksempel aluminiumoksid. Når du bruker dette eller det andre sorbenten, må teknologien følges nøye for at resultatet skal være nøyaktig, for eksempel fordi silikagel kan gi et feil resultat hvis luften i laboratoriet er for fuktig.
Løsningsmidler brukes som den mobile fasen, for eksempel vann, eddiksyre, etanol, aceton, benzen. Valget av løsemiddel må tas på en forsvarlig måte, fordi resultatet av kromatografi avhenger direkte av dets kvaliteter (viskositet, tetthet, renhet). Et individuelt løsemiddel velges for hver analyserte prøve.
Analyse
Prøven må fortynnes i løsemiddel. Hvis fullstendig oppløsning ikke forekommer og for mange urenheter gjenstår, kan prøven rengjøres ved ekstraksjon.
Påføringen av prøven på platen kan gjøres automatisk eller manuelt. Automatisk påføring bruker en mikrospraymetode der hver prøve sprøytes på riktig område av underlaget. For manuell påføring brukes en mikropipette. Blyantmerker plasseres på platen for hver prøve. Hver prøve påføres med kapillær på platen i en linje i tilstrekkelig avstand fra merkene for ikke å reagere med karbon fra ledningen.
Platen plasseres i et kar, i bunnen av hvilken eluenten helles. Støtten plasseres med den ene kanten inn i fartøyet opp til den merkede linjen. Fartøyet er tett lukket for å unngå fordampning av mobilfasen. Under påvirkning av kapillære krefter begynner elueringsmidlet å stige opp det absorberende laget. Når elueringsmidlet når et visst nivå, fjernes platen fra beholderen og tørkes.
Hvis ønsket stoff ikke har farge, vil det ikke være synlig på underlaget. Derfor utføres visualisering - bearbeiding av platen med joddamp eller andre fargestoffer.
Etter slik behandling blir resultatet evaluert. Fargede områder med varierende intensitet vises på sorbenten. For å bestemme et stoff (eller en gruppe stoffer) sammenlignes de fargede områdene, deres størrelse, intensitet og mobilitet med en referanseprøve.
TLC-metoden brukes mye fordi den er rask, billig, nøyaktig, intuitiv, ikke krever komplisert utstyr og er lett å tolke.